基因槍的操作方法

基因槍的操作方法

l．材料準備

在9cm2培養皿上鋪一薄層培養基，把材料(一般用未成熟胚、成熟胚、小愈傷組織、懸浮細胞、原生質體等)平鋪於培養皿中心，直徑在3cm範圍內。

2．金粉的處理

取60mg金粉或鎢粉置於離心管中，加入lml無水乙醇，充分振蕩3min，以9615g離心1rain，去上清，再加入lml無菌水充分混勻後，以9615g離心，重複上述步驟3次。*後，將金粉懸浮於lml無菌蒸餾水中，置4‘C或室溫下儲存。

3．DNA的處理

取50tA金粉懸浮液，依次加入5rd的質粒DNA(1．0／lg～1)溶液、50／／l 0．1mol／L亞精胺(所用的溶液經無菌**)，振蕩3rain後，在室溫下放置10min，以9615g離心10s，棄去上清液；加入250~1無水乙醇，振蕩後以9615g離心10s，棄上清液。沉澱重新懸浮於60／1l無水乙醇中，可供5槍(每槍10~1)使用。

4．基因槍的操作

基因槍的**操作均在無菌條件下進行，具體步驟如下：

1)先用70％乙醇對基因槍表麵及樣品室進行**。同時，用70％乙醇將阻擋網和可裂圓片，微彈載體及其固定器、固定工具浸泡15min後，放在超淨台上晾乾。可裂膜片、固定蓋、微彈載體發射裝置可用70％乙醇進行表麵**，吹乾。

2)將微粒載片嵌入固定環中，取DNA及金粉的混合物加於微粒載片中心，乾燥lmin左右。

    3)安裝可裂膜於其托座上，順時針擰到氣體加速器上。

4)將空間環、阻擋網、阻擋網托座、微粒載片及固定環(帶有微粒的麵朝下)安裝好，旋緊蓋子，插入搶中。

    5)把樣品放在轟擊室中，關好門。

6)打開氦氣瓶的總閥，順時針轉氦氣調節閥，使氦壓表指針的示數高於可裂膜壓力200Psi(＝1．379MPa)。

7)打開基因槍及變壓器開關。

8)按動真空鍵，待真空度至26—28inHg(＝88．05～94．82kPa)時，迅速按下Hold鍵，接著按住發射鍵，並保持不動，直到激發為止。

    9)按通氣鍵待真空表歸零後，取出樣品。

10)關機。把氦氣瓶的總開關旋緊，打一次空槍，把氦壓表指針歸零後，再逆時針旋轉氦壓表調節閥；關閉基因槍的總開關及變壓器開關。

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