紫外分光光度法的注意事項

使用紫外分光光度法的注意事項：

1 儀器的校正和檢定： 1．1 波長 由於溫度變化對機械部分的影響，儀器的波長經常會略有變動，因此除應定期對所用的儀器進行**校正檢定外，還應於測定前校正測定波長。1．2 吸收度 吸收度的**度可用重鉻酸鉀的硫酸溶液檢定。 1．3 狹縫寬度  選擇儀器的狹縫寬度，應以減小狹縫寬度時供試品的吸收度不再增加為準，對於《中國藥典》UV法測定的大部分品種，可以使用2nm縫寬，但對某些品種如青黴素鉀及鈉的吸收度檢查則需要1nm縫寬或更窄，否則其264nm的吸收度會偏低。 1．4 天平和玻璃儀器的檢定所用的容量儀器及分析天平應經過檢定，如有偏差應加上校正值。 1．5 吸收池配對  石英吸收池對紫外光亦有吸收，1 em的吸收池在波長220～270 nm的範圍內，以空氣作為100％，其透光率往往小於100％，同時每個吸收池不可能完全相同，故在每次測定前應做吸收池配對試驗。方法是取乾燥潔淨的吸收池，均裝入測定用空白溶劑，以一隻吸收池作空白，用測定時所用的波長測定其他吸收池的吸收度，*後選擇吸收*小的一隻作為配對，測定並記錄下其它吸收池的吸收度，供試品液的實際吸收度應是與吸收池(有空白溶劑時)吸收度之差。為減少誤差，常用一個配對杯測定若乾樣品(也減少計算麻煩)，但應注意換液時充分洗滌。

2 對溶劑的要求：由於溶劑與溶質分子間形成氫鍵、偶極化等的影響，可以使溶質吸收波長發生位移。通常極性溶劑比非極性溶劑的影響大，在選擇溶劑時應予以注意。測定供試品前，應先檢查所用的溶劑在測定供試品所用的波長附近是否有吸收峰，是否影響供試品測定。每次測定時應采用同一廠家、同一批號的試劑配製混合均勻的同一批溶劑。

3 檢驗： 3．1 溶液配製 稱量應按藥典規定進行。配製測定溶液時稀釋轉移次數應儘可能少，轉移稀釋時所取容積一般應不少於5mL。含量測定供試品應稱取2份，如為對照品比較法，對照品也應稱取2份。吸收係數檢查也應稱取供試品2份，平行操作。每份結果對平均值的偏差應在4-0.5％以內。作鑒彆或檢查時可取樣品1份。3．2 測定 除另有規定外，應在規定的吸收峰波長4-2 nm以內，再測試幾個點的吸收度，以核對供試品的吸收峰波長位置是否正確，除另有規定外，吸收峰***長應在該品種項下規定的波長4-1nm以內，否則應考慮該試樣的真偽、純度以及儀器波長的**度。取吸收池時，手指拿毛玻璃麵的兩側。樣品溶液的量以池體積的4／5為宜，使用揮發性溶液時應加蓋，透光麵要用擦鏡紙由上而下擦拭乾淨，檢視應無殘留溶劑，為防止溶劑揮發後溶質殘留在池子的透光麵，可先用蘸有空白溶劑的擦鏡紙擦拭，然後再用乾擦鏡紙拭淨。吸收池放人樣品室時應注意每次放入的方向相同。使用後用洗滌劑及水衝洗乾淨，晾乾防塵保存。吸收池如汙染不易洗淨時可用發煙硫酸+硝酸(3：1 )混合液稍加浸泡後，洗淨備用。如用鉻酸鉀清潔液清洗時，吸收池不宜在清潔液中長時間浸泡，否則清潔液中的鉻酸鉀結晶會損壞吸收池的光學表麵，並應充分用水衝洗，以防鉻酸鉀吸附於吸收池表麵。

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