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PCR基因擴增儀的工作原理
日期：2025-05-06 08:06
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摘要：
什麼是PCR技術？ PCR（Polymerase Chain Reaction）技術，中文譯為聚合酶鏈式反應，是一種在體外（試管、切片…）擴增核酸的技術。PCR的基本反應包括以DNA為模板的反應和以mRNA為模板的反應。 PCR技術是模擬體內天然DNA（脫氧核糖核酸）的複製過程。以擴增DNA為例，其基本原理是在模板、引物、4種dNTP和耐熱DNA聚合酶存在的條件下，特異擴增位於兩段已知序列之間的DNA區段的酶促合成反應。
PCR基因擴增儀的工作原理是怎樣的？ PCR反應一般設置20~40次循環，每一循環包括高溫變性、低溫退火、中溫延伸三步反應。每一循環的產物作為下一個循環的模板。PCR的擴增效率很高，如果循環次數是30次，那麼新生DNA片段理論上達到230拷貝（約為109個分子）。 PCR反應每個循環的三個基本反應步驟如下：①模板DNA的變性：模板DNA經加熱至94℃左右一定時間後，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA產物解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；②模板DNA與引物的退火（複性）：模板DNA經加熱變性成單鏈後，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合；③引物的延伸：溫度升到72℃左右，DNA模板－引物結合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留複製原理，合成一條新的與模板DNA 鏈互補的半保留複製鏈。重複循環變性－－退火－－延伸三過程，就可獲得更多的“半保留複製鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環的模板。每完成一個循環需 2～4分鐘，2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。到達平台期（Plateau）所需循環次數取決於樣品中模板的拷貝。 PCR技術的特異性取決於引物與模板結合的特異性。 PCR儀也叫基因擴增儀，它是利用PCR技術對特定基因做體外的大量合成，用於以檢測DNA/RNA為目的的各種基因分析。
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