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細胞培養的注意事項
日期:2025-05-09 04:07
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摘要:
體外培養的細胞直接生活在培養基中,因此培養基應能滿足細胞對營養成分、促生長因子、**、滲透壓、pH等諸多方麵的要求。細胞培養的注意事項:
一、營養成分 維持細胞生長的營養條件一般包括以下幾個方麵: 1.氨基酸:是細胞合成蛋白質的原料。**細胞都需要12種必須氨基酸,此外還需要穀氨酰胺,它在細胞代謝過程中有重要作用,所含的氮是核酸中嘌令和嘧啶合成的來源。 2.單糖:培養中的細胞可以進行有氧與無氧酵解,細胞對葡萄糖的吸收能力*高,半乳糖*低。體外培養動物細胞時,幾乎**的培養基或培養液中都以葡萄糖作為必含的能源物質。 3.維生素:主要扮演輔酶、輔基的角色,必不可少。 4.無機離子與微量元素:細胞生長除需要鈉、鉀、鈣、鎂、氮和磷等基本元素,還需要微量元素,如鐵、鋅、硒等。
二、促生長因子及** 各種**、生長因子對於維持細胞的功能、保持細胞的狀態(分化或未分化)具有十分重要的作用。有些**對許多細胞生長有促生長作用,如胰島素,它能促進細胞利用葡萄糖和氨基酸。有些**對某一類細胞有明顯促進作用,如氫化可的鬆可促進表皮細胞的生長等。
三、滲透壓 細胞必須生活在等滲環境中,大多數培養細胞對滲透壓有一定耐受性。人血漿滲透壓290mOsm/kg, 可視為培養人體細胞的理想滲透壓。對於大多數哺乳動物細胞,滲透壓在260-320mOsm/kg的範圍都適宜。
四、pH值動物細胞大多數需要輕微的堿性條件,pH值約在7.2-7.4在細胞生長過程中,隨細胞數量的增多和代謝活動的加強,二氧化碳不斷被釋放,培養液變酸,PH值發生變化。由於NaHCO3容易分解為二氧化碳,很不穩定,致使緩衝係統難以**地控製。合成培養基中使用了NaHCO3-CO2緩衝係統,並采用開放培養,使細胞代謝產生的CO2及時溢出培養瓶,再通過穩定調節溫箱中CO2濃度(5%),與培養基中的NaHCO3處於平衡狀態。
五、無毒、無汙染的微環境 體外生長的細胞對微生物及一些有害有毒物質冇有抵抗能力,因此培養基應達到無化學物質汙染、無微生物汙染(如**、**、支原體、病毒等)、無其他對細胞產生損傷作用的生物活性物質汙染(如抗體、補體)。
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