熒光定量PCR的應用範圍
熒光定量PCR的應用範圍,具體來說可以分為以下幾個方麵:
(1)分析點突變和等位基因熒光定量PCR可以進行點突變分析和等位基因分析,用不同的熒光報告基團標記Taqman探針,然後分彆與野生型和突變型雜交,如果一種熒光信號明顯強於另一種熒光信號,則表明它是純合子;如果兩種熒光信號都明顯增強,則表明它是雜合子。另外分子信標(Molecular Beacon)就是專門為這種技術設計的探針。
(2)基因表達的定量分析熒光定量PCR對各種基因的表達進行定量分析,如:同一基因在不同組織中的表達差異、同一基因在不同**處理後的表達差異、轉基因食品的檢測。過去*常用的高通量篩選基因表達差異的技術是cDNA芯片和差異顯示,但這兩種技術的缺點是隻能定性而非完整意義上的定量分析。實時PCR技術和高通道實時PCR儀的出現,無疑為這種檢測提供了極大的方便。
(3)DNA甲基化檢測熒光定量PCR可以進行DNA甲基化檢測,DNA甲基化同人類的許多**有關,特彆是癌症,Laird報道了一種稱作Methylight的技術,在擴增之前先處理DNA,使得未甲基化的胞嘧啶變成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不受影響,用特異性的引物和Taqman探針來區分甲基化和非甲基化的DNA,這種方法不僅方便而且靈敏度更高。
(4)單核苷酸多態性分析熒光定量PCR可以進行單核苷酸多態性的分析,檢測單核苷酸多態性對於研究個體對不同**的易感性或者個體對特定**的不同反應有著重要的意義,因分子信標結構的巧妙性,一旦SNP的序列信息是已知的,采用這種技術進行高通量的SNP檢測將會變得簡單而**。
(5)定量定性分析傳染性**熒光定量PCR對傳染性**進行定量定性分析,這在我國應用比較廣泛,大家比較熟悉。許多生產臨床PCR試劑的廠商已經陸續推出了一係列的診斷試劑,如:肝炎係列、性病係列、腫瘤係列等等。
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