詳細介紹溫度梯度PCR和降落PCR有什麼不同

詳細介紹溫度梯度PCR和降落PCR有什麼不同?
1.什麼是溫度梯度PCR？溫度梯度PCR是指在退火溫度不太明確時，為了找到*優退火溫度，在一台PCR儀上同時做多管PCR反應。每一管放在儀器內不同列或是不同行上，分彆進行PCR反應。例如：在50℃-60℃可以分6管，分彆為50，52，54，56，58，60度。在不同的管類進行PCR反應。PCR反應後，經過電泳檢測的比較，看看哪個溫度的****。總之是通過溫度梯度PCR反應，來進行退火溫度的優化。

2.什麼是降落PCR？降落PCR是在同一個PCR管內進行PCR反應，隻是每個循環的溫度不同（如每個循環降1度）。一般兼並引物多采用這種方法。降落PCR（touchdown PCR），通過設計多循環反應的程序，以使相連循環的退火溫度越來越低。由於開始時的退火溫度選擇為高於估計的Tm值，隨著循環的進行，退火溫度逐漸降到Tm值，並*終低於這個水平，用於確保**個引物—模板雜交事件發生在*互補的反應物之間，即那些產生目的擴增產物的反應物之間。儘管退火溫度*終會降到非特異雜交的Tm值，但此時目的擴增產物已開始幾何擴增，在剩下的循環中處於超過任何滯後（非特異）PCR產物的地位。由於目標是在較早的循環中避免低Tm值配對，在TD—PCR中*好應用熱啟動技術。設計時，退火溫度的範圍應跨越15℃左右，從高於估計Tm值至少幾度到低於它10℃。實驗中如持續出現假象帶（雜帶），則是因為起始退火溫度太低，或目的擴增產物和非目的產物的Tm值相差無幾，或非目的擴增物以更高的擴增效率擴增，可把退火溫度每降低1℃所需的循環數增加到3或4。

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