分光光度計的常見用途有哪些

分光光度計的常見用途有哪些

核酸的定量

核酸的定量是分光光度計使用頻率*高的功能。可以定量溶於緩衝液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA，以及RNA。核酸的*高吸收峰的吸收波長260 nm。每種核酸的分子構成不一，因此其換算係數不同。定量不同類型的核酸，事先要選擇對應的係數。如：1OD 的吸光值分彆相當於50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。測試後的吸光值經過上述係數的換算，從而得出相應的樣品濃度。測試前，選擇正確的程序，輸入原液和稀釋液的體積，爾後測試空白液和樣品液。然而，實驗並非一帆風順。讀數不穩定可能是實驗者***的問題。靈敏度越高的儀器，表現出的吸光值漂移越大。

蛋白質的直接定量（UV法）

這種方法是在280nm波長，直接測試蛋白。選擇Warburg 公式，光度計可以直接顯示出樣品的濃度，或者是選擇相應的換算方法，將吸光值轉換為樣品濃度。蛋白質測定過程非常簡單，先測試空白液，然後直接測試蛋白質。由於緩衝液中存在一些雜質，一般要消除320nm 的“背景”信息，設定此功能“開”。與測試核酸類似，要求A280的吸光值至少大於0.1A，*佳的線性範圍在1.0-1.5 之間。實驗中選擇Warburg 公式顯示樣品濃度時，發現讀數“漂移”。這是一個正常的現象。

比色法蛋白質定量

蛋白質通常是多種蛋白質的混合物，比色法測定的基礎是蛋白質構成成分：氨基酸（如酪氨酸，絲氨酸）與外加的顯色基團或者染料反應，產生有色物質。有色物質的濃度與蛋白質反應的氨基酸數目直接相關，從而反應蛋白質濃度。

**細胞密度（OD 600）

實驗室確定**生長密度和生長期，多根據經驗和目測推斷**的生長密度。在遇到要求較高的實驗，需要采用分光光度計準確測定**細胞密度。OD600是追蹤液體培養物中微生物生長的標準方法。以未加菌液的培養液作為空白液，之後定量培養後的含菌培養液。為了保證正確操作，必須針對每種微生物和每台儀器用顯微鏡進行細胞計數，做出校正曲線。實驗中偶爾會出現菌液的OD值出現負值，原因是采用了顯色的培養基，即**培養一段時間後，與培養基反應，發生變色反應。另外，需要注意的是，測試的樣品不能離心，保持**懸浮狀態。

UV-5300PC紫外可見分光光度計、759S紫外可見分光光度計、UV-2600進口紫外可見分光光度計