教你校正紫外分光光度計

教你校正紫外分光光度計

我們知道，分光光度法的*重要的一個物理化學量是吸光度。為了獲得準確的研究結果，準確測得樣品溶液的吸光度是非常重要的。一般，分析結果的不可靠性與偶然誤差和係統誤差有關。偶然誤差影響測量的精密度，可通過足夠數量測量的統計處理來減少；係統誤差影響測量結果的準確度，可在大體相同實驗條件下，用比較一種物質的準確測量結果，使係統誤差統一起來。而分光光度計的係統誤差（波長校正、分光光度計的慢散光、放大器的線性響應、暗電流和比色皿的光程）和操作誤差（溫度改變、儀器讀數、操作者的改變、使用物質的純度、稱量和濃度、pH）對測量吸光度的影響是可以檢查和校正的。關於操作誤差，多數情況下，通過嚴格按操作程序測量、儀器調零、準確稱量等來控製或減少這種誤差的產生。關於儀器的係統誤差，可通過對分光光度計的定期校正來克服，若所需準確度很高的測量，則必須天天校正。

校正內容

1.波長的準確度試驗，以儀器顯示的波長數值與單色光的實際波長值之間誤差表示，應在±1.0nm範圍內。可用儀器中氘燈的486.02nm與656.10nm譜線進行校正；2.吸收度的準確度試驗；3.雜散光的試驗；4.波長重現性試驗；5.分辨率試驗。

吸光度的校正方法

校正吸光度常用一很純物質一定濃度的溶液為標準，且此溶液的吸光度係數經不同實驗室核對，為了使標準液吸光度不受測定波長的微移動而有改變，常選擇具有較平滑吸收高峰的物質，同時要求溶液穩定，且在相當的波長範圍內吸收度的改變符合Beer-Lambert定律，常用硫酸銅、硫酸銨鈷和硝酸鈉或鉀的溶液。鉻酸鉀溶液是*常用的標準溶液，此溶液在紫外區和可見區均適用。

波長或波數的校正方法

可用具有窄吸收帶的溶液，濾光片或蒸氣來校正所需要的光波範圍。如果要求很高的精密度時，可用放電燈泡發射的射線來校正。有的光譜儀其上已裝有一個為校正用的燈。苯的蒸氣對校正一定範圍的波長亦很有用，可用一小滴苯放於一厘米厚的吸收杯中，測其吸收波長，在遠紫外區可用氧氣的吸收帶進行校正。用各種稀土金屬的濾光片，可以很快地校正波長，但準確度不如上述方法高。常用含有鈥和釹、鐠離子的濾光片。

雜散光的校正方法

小量的雜散光往往會引起較大的測量誤差，它的校正可用一個能完全吸收某一波長單色光，且在其他波長吸收很弱的溶液。從這個溶液所表現的透光情況可推測雜散光的近似值。由雜散光帶來的偽吸收帶，亦可用Beer-Lambert定律來檢查，但用此定律檢查偽吸收帶誤差較大。由切斷範圍之外所表現的透射比可得出近似的雜散光百分數。若所含雜散光大於0.1%，應設法減低，或對測得的吸收光度進行校正。由雜散光引起的誤差與雜散輻射成正比，因此校正值很容易從化合物的近於正確的曲線計算而得。此外，還可用一個適當的濾光片，該濾光片在測定波長範圍內完全透光，但吸收此範圍外的光波，由此來消除雜散光。

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