分光光度計常見問題指導

分光光度計是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長範圍內光的吸收度，對該物質進行定性和定量分析。可廣泛應用於製藥、醫療衛生、化學化工、環保、地質、機械、冶金、石油、食品、生物、材料、計量科學、農業、林業、漁業等領域中的科研、教學等各個方麵，下麵將為您詳細介紹分光光度計。

一、分光光度計的分類（按照波長及應用領域劃分）

1.紫外分光光度計：測定波長範圍為200～400nm的紫外光區。

2.可見光分光光度計：測定波長範圍為400～760 nm的可見光區。

3.紅外分光光度計：測定波長範圍為大於760nm的紅外光區。

4.熒光分光光度計：用於掃描液相熒光標記物所發出的熒光光譜。

5.原子吸收分光光度計：光源發出被測的特征光譜輻射，被經過原子化器後的樣品蒸氣中的待測元素基態原子所吸收，通過測定特征輻射被吸收的大小，來求出被測元素的含量。

二、分光光度計工作原理

分光光度計計采用一個可以產生多個波長的光源，通過係列分光裝置，從而產生特定波長的光源，光源透過測試的樣品後，部分光源被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
     

三、分光光度計的基本結構

1.顯示器

顯示器是將光電管或光電倍增管放大的電流通過儀表顯示出來的裝置。常用的顯示器有檢流計、微安表、記錄器和數字顯示器。檢流計和微安表可顯示透光度（T%）和吸光度（A）。數字顯示器可顯示T%、A和C（濃度）。

2.檢測器

檢測器是將透過溶液的光信號轉換為電信號，並將電信號放大的裝置。常用的檢測器為光電管和光電倍增管。

3.比色杯

比色杯又稱為吸收池或比色皿。比色杯常用無色透明、耐腐蝕和耐酸堿的玻璃或石英材料做成，用於盛放待比色溶液的一種裝置。

4.單色器

將來自光源的複合光分散為單色光的裝置稱為分光係統或單色器。單色器可分成濾光片、棱鏡和光柵。濾光片能讓某一波長的光透過，而其它波長的光被吸收，濾光片可分成吸收濾光片、截止濾光片、複合濾光片和乾涉濾光片。

5.光源

光源指一種可以發射出供溶液或吸收物質選擇性吸收的光。光源應在一定光譜區域內發射出連續光譜，並有足夠的強度和良好的穩定性，在整個光譜區域內光的強度不應隨波長有明顯的變化。實際上許多光源的強度都隨波長變化而變化。為了解決這一問題，在分光光度計內裝有光強度補償裝置，使不同波長下的光強度達到一致醫學教育。
     

四、分光光度計測量方式

在一定的環境中應用分光光度計*常用的定量分析方法是標準曲線法。即先用標準物質配製一定濃度的溶液，再將該溶液配製成一係列的標準溶液。在一定波長下，測試每個標準溶液的吸光度，以吸光度值為縱坐標，標準溶液對應得濃度為橫坐標，繪製標準曲線。*後，將樣品溶液按標準曲線繪製程序測得吸光度值，在標準曲線上查出樣品溶液對應的濃度或含量。

五、分光光度計使用方法

1.使用分光光度計前，應先了解本儀器的結構和工作原理。以及各個操作旋鈕之功能。在未接通電源前，應該對儀器的**性進行檢查，電源線接線應牢固。通地要良好，各個調節旋鈕的起始位置應該正確，然後再接通電源開關。並在使用前先檢查放大器暗盒的矽膠乾燥筒(在儀器的左側)，如受潮變色，應更換乾燥的藍色矽膠或者倒出原矽膠，烘乾後再用。

2.將靈敏度旋鈕調置“1”檔(放大倍率*小)。

3.開啟分光光度計電源，指示燈亮，選擇開關置於“T”，波長調至測試用波長。儀器預熱20分鐘。

4.打開試樣室蓋(光門自動關閉)，調節“0”旋鈕，使數字顯示為“00.0”，蓋上試樣室蓋，將比色皿架置與蒸餾水校正位置，使光電管受光，調節透過率“****”旋鈕，使數字顯示為“100.0”。

5.如顯示不到“100.0”，則可適當增加微電流放大器的倍率檔數，但儘可能置低倍率檔使用，這樣儀器將有更高的穩定性。但改變倍率後必須按(4)重新校正“0”和“****”。

6.預熱後，按(4)連續幾次調整“0”和“****”，儀器即可進行測定工作。

7.吸光度A的測量按(4)調整儀器的“00.0”和“****”，將選擇開關置於“A”，調節吸光度調零旋鈕，使得數字顯示為“.000”，然後將被測樣品移入光路，顯示值即為被測樣品的吸光度值。

8.濃度C的測量：選擇開關由“A”旋置“C”，將已標定濃度的樣品放入光路，調節濃度旋鈕，使得數字顯示為標定值，將被測樣品放入光路，即可讀出被測樣品的濃度值。

9.如果大幅度改變測試波長時，在調整“0”和“****”後稍等片刻，(因光能量變化急劇，光電管受光後響應緩慢，需一段光響應平衡時間)，當穩定後，重新調整“0”和“****”即可工作，吸收池(即比色杯)。
     

六、分光光度計使用注意事項

1.分光光度計在使用儀器前，必須仔細閱讀其使用說明書。

2.若大幅度改變測試波長，需稍等片刻，等燈熱平衡後，重新調零及滿度後，再測量。

3.指針式儀器在未接通電源時，電表的指針必須位於零刻度上。若不是這種情況，需進行機械調零。

4.操作人員不應輕易觸動燈泡及反光鏡燈，以免影響光效率。

5.分光光度計放大器靈敏度換擋後，必須重新調零。

七、分光光度計常見故障處理

1.樣品出峰位置不對

這是由於波長傳動機構產生位移，應檢查通過氘燈的656.1nm的特征譜線來判斷波長是否**，對於**儀器而言處理手段相對簡單，使用儀器固有的自動校正功能即可;而對於相對簡單的儀器，這種調整則需要**人員來調修。

2.冇有任何檢測信號輸出

這是由於冇有任何光束照射到樣品室內的原因應將波長設定為530nm，狹縫儘量開到*寬檔位，在黑暗的環境下用一張白紙放在樣品室光窗出口處，觀察白紙上有無綠光斑影像。檢查光源鏡是否轉到位，雙光束儀器的切光電機是否轉動了(耳朵可以聽見電機轉動的聲音)。

3.樣品室內無任何物品的情況下，全波長範圍內基線噪聲大

這是由於光源鏡位置不正確、石英窗表麵被濺射上樣品，應觀察光源是否照射到入射狹縫的中央，石英窗上有無汙染物。再重新調整光源鏡的位置，用乙醇清洗石英窗。
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