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熒光定量PCR儀的選購注意事項
日期：2025-05-09 09:16
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摘要：
當我們走出誤區，想要選擇一款*適合自己需求的熒光定量PCR儀的選購注意事項又是怎樣呢？
1、儀器的檢測通量在購買定量PCR儀的時候要根據實驗實的需要來選擇不同通量的儀器。目前市麵上的熒光定量PCR的檢測通量小到16個多到384個。如果進行一般的基因表達研究或病原體檢測，實在不必購買昂貴的儀器，96孔的通量足夠用；需要尋找要新藥靶點和**標記的實驗室可以考慮購買384孔板的儀器。假如經費有限無法購買384孔板儀器的實驗室，可以考慮購買運行速度快（帶有FAST模塊）的96孔板熒光定量PCR儀。有了高通量的儀器，你會發現樣品的製備和小體係、多樣本的PCR體係構建成為限製實驗速度和結果的頸瓶。
2、硬件設計特點熒光定量PCR儀主要有傳統的96孔板式、**的離心式等，每種設計都有它的獨到之處但也都有無法避免的缺憾。傳統的96孔板的熒光定量PCR可以容納的樣本量大，而且無需特殊的耗材。有些傳統的96孔板的儀器采用鹵鎢燈激發、CCD檢測，這些光學結構在96孔板的頂部，每個樣品孔距光源和檢測器的光程各不相同——邊緣效應，對結果產生影響。為了保證**、準確的實驗結果，這類儀器在實驗過程中通常會使用ROX（一種熒光染料）或專用的Reference dye作為參照校正實驗結果。鹵鎢燈的使用壽命短、更換成本較高已經成為很多用戶**的問題。在實驗過程中鹵鎢燈作為一種熱光源，產生較多熱能對實驗結果有一定的影響。CCD*大的優點就是可以同時掃描所有樣品中的熒光信號，但是靈敏度較低，而且同時檢測樣品間的熒光信號存在乾擾。**的離心式的儀器通常選用LED激發、PMT檢測，離心式的設計上避免了邊緣效應。LED光源是冷光源對實驗冇有影響，因此無需采用其他熒光染料校正儀器，而且使用壽命長無需經常更換。PMT每次隻能收集單個熒光信號，但是檢測靈敏度高。但這類儀器運行速度非常快，但也存在樣本量小、耗材昂貴、冇有梯度功能、存在時間積分等缺點。隨著熒光定量PCR技術的使用，聰明的儀器生產商紛紛在傳統的96孔板儀器上大作改進。首先是Stratagene的Mx3000p在檢測上突破了使用CCD改用PMT檢測熒光信號，大大提高了實驗的靈敏度，但激發光源仍然沿用傳統的鹵鎢燈並且冇有梯度功能。
3、運行速度在熒光定量PCR儀的眾多技術參數中，升降溫速度也是廠家喜歡大力宣傳的指標。更快的升降溫，可以縮短反應進行的時間，而且縮短了可能的非特異性結合、反應的時間，提高PCR的特異性。為了更好的完成實驗，各個廠家紛紛推出能快速運行的熒光定量PCR儀。例如ROCHE推出的Lightcycler2.0利用空氣動力學原理，可在半小時左右完成30-40個循環。ABI的7500可以選配FAST模塊擁有5°C/秒的升降溫速度，可在40分鐘左右完成30-40個循環。
4、靈活性大規模繁忙的實驗室設備固然讓人羨慕，但是常規實驗室同樣可以有精彩的選擇。現在的儀器供應商擁有眾多技術專家，有的還能提供整個分子生物學的基礎研究平台，不但了解、滿足您現在的需求，而且還考慮到了你可能變化的需求——升級和更換模塊。Bio-rad的Mycycler就可以選擇模塊升級為定量PCR儀。ABI的7900可以選擇將96孔槽變為384孔槽。像離心式的雙通道的Rotor-gene3000A 就可以根據您研究的需要升級成四通道的熒光定量PCR儀。
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