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熒光定量PCR儀的選購誤區
日期：2025-06-24 01:40
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摘要：
熒光定量PCR因操作方便、運行速度快、實驗結果**，受到越來越多的分子生物學研究者青睞。在實驗技術成熟的今天，也許對你來說，*難得不是實驗技術上的問題——而是選擇哪一種熒光定量PCR儀——你要征詢實驗室成員的意見、分析實驗室目前乃至將來的需求、平衡實驗室的預算，更要詳細研究各種極富誘惑力的宣傳資料。麵對各種不同性能的產品，您又該如何選擇呢？首先建議大家走出認識熒光定量PCR儀的選購誤區（兩個誤區）：
誤區一：儀器通道越多越好隨著PCR技術的成熟運用，多重擴增越來越熱鬨，熒光定量PCR儀也不能幸免。從*初ABI公司推出的單通道熒光定量PCR儀發展到如今各個廠家都推出4通道、5通道甚至6通道熒光定量PCR儀，眼花繚亂的選擇讓人無所適從，就有人一不小心走進了“通道越多越好”的誤區。在使用有些廠家5通道的熒光定量儀時，為了確保實驗結果的**性和**性都要在實驗中使用ROX（一種熒光染料）或專用的Reference dye ，這些熒光染料都必須單*使用一個檢測通道。這樣以來，真正能檢測多重PCR熒光信號的有效通道隻有4個，而且使用校正染料可能會增加後期的使用成本。有的熒光定量PCR的檢測通道是隻為自已廠家的專用的熒光染料或試劑開放的，有效檢測通道也*非像宣傳資料**稱的那麼多。在購買前確認熒光定量PCR儀器的有效檢測通道尤為重要，不能單單隻聽宣傳。考慮多重熒光定量PCR的通道數的時候也應該從實驗室實際情況出發，多重PCR並非人人適用、人人可用，因為它使實驗複雜化了。
誤區二：real-time PCR儀無需梯度功能對於使用染料法的定量PCR反應，雖然有各種各樣的PCR引物設計軟件或者經驗公式計算熔解溫度（Tm值），但運用的公式不同、引物序列不同，Tm值的差異會很大。引物的熔解溫度決定了退火溫度。而且模版中堿基的組合千變萬化，對於特殊片斷，經驗公式得到的數據不一定能得出**的結果，退火溫度細微的差異對結果都可能產生決定性的影響，因而“摸條件”一度是讓人很頭疼的問題。梯度PCR的出現部分解決了一些問題——在反應過程中每個孔的溫度控製條件可以在**範圍內按照梯度變化，根據結果，一步就可以摸索出*適合的反應條件。不單退火溫度，連變性溫度和延伸溫度都可以*化——對於多種聚合酶混合酶擴增如Invitrogen、Clontech、Promega的多數高保真Taq酶來說這個非常重要，因為Taq和校正酶的*佳反應溫度可能有顯著差異，*化延伸溫度就顯得很重要。
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